关于FISH标准化及质控我们可以做什么?

在过去的16年多的时间里,我因为工作原因有幸走访了国内及香港的400多家医院的病理科,并有机会在实验室与技术老师们一起实践和探讨病理技术。

        作为医生出身的我,很理解临床医生对病理诊断的要求,而病理医生的精确诊断又有赖于各种病理技术制作的实验结果。第一次接触免疫组化技术是在2006年夏天参加的一次BioGenex代理商组织的研讨会,那次会议几乎会聚了北京全部的病理大咖。讲者是一位年轻人,就是后来成为我良师益友的台湾的林钜逵老师。给我印象最深的是在会议提问阶段,很多主任提出了诸多困扰他们的因IHC染色效果不佳难以做出诊断的问题,而问题的答案竟然和病理技术的操作有关。这让我对IHC技术产生了极大的兴趣,更确切地说是爱上了病理技术。"我爱病理"是林老师在衡道病理做的一次演讲,内容讲出了病理人对专业技术的热爱和追求。是的,热爱病理,热爱病理技术,热爱新技术带来的挑战,热爱变幻莫测的实验条件带来的困惑,是我们得以坚持病理事业的原动力。

       我们每一位技术老师都有过这样的经历,就是每当我们通过解决一个个的问题,做出满意的实验结果,都会令我们这群实验者充满喜悦和成就感,有一种将成功经验分享给更多人的冲动。创建这个病理技术沙龙就是希望有机会可以和大家一起 :

      1) 交流各个实验室遇到的点点滴滴,也许一个动作的改变可以带来实验结果的巨大改善;

       2) 分享病理技术最新进展;

       这是我多年的愿望,希望能够为病理技术的标准化及质控尽一份微薄之力。


关于FISH标准化及质控

我们可以做什么?


       荧光原位杂交(FISH)技术作为辅助鉴别诊断及指导临床靶向用药的一种方法被广泛应用于临床病理检测,此项技术具有敏感度高、信号强、背景低等优点。随着分子细胞遗传学技术的迅速发展,FISH探针标记物数量及种类都在不断增加,应用范围也在不断扩展。随之检测量的增加,如何切实做到FISH实验的标准化,是否有可行的质控手段,就成为临床实践的亟待解决的问题。

        FISH检测根据检测标本的不同,操作步骤略有差异,主要流程包括:预处理、变性/杂交、杂交后清洗等环节。做过FISH实验的老师们都知道,学习和读懂中华病理学杂志颁布的FISH技术共识与指南容易,而实践的过程却充满挑战。尽管在FISH新项目开展之前,技术人员都会进行包括方法学及试剂等性能验证,建立符合实验室的标准化操作流程,以确保结果的准确性。但是,几十步操作流程做下来还是会遇到很多因为人工操作,试剂差异等等,出现各种各样的问题,究其原因可以追溯到从标本固定开始的每一个环节。有时,即使在确定标本固定、组织脱水、透明、浸蜡、组织切片均按标准化流程操作,而探针也是用的是商品化的即用型探针,依然会出现染色的各种问题。

      如何解决?自动化的染色设备是否有助于问题的解决?BioGenex   Xmatrx 系列产品包括Elite,Infinity, Nano, NanoVIP 及Mini等型号,均可以用于FISH染色。在这里分享一下采用Nano自动化设备做FISH染色的经验。

       这里所描述的一次FISH实验,采用了一间实验室平常使用的商品化探针(结果样片见图一)。所不同的是此次实验从烤片开始到永久封片结束均在自动化设备上完成,其中脱蜡、核酸修复及酶消化均采用BioGenex的试剂,其他均为科室日常使用的试剂及冲洗液(结果见图二)

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